測定植物木質素和酚類化合物 WHATMAN GF/C濾紙
測定植物木質素和酚類化合物 WHATMAN GF/C濾紙
測木質素
準備：**鍋，電爐1000W， 100毫升或150毫升三角瓶若干，漏斗1個，藥匙，玻璃棒，濾紙若干，72%硫酸，乙醇。
200ｍｇ粉末與4毫升72%硫酸在三角瓶中30度脫氫3小時，或將干葉子加硫酸后，用玻棒不斷研磨至糊狀，在30度3小時。用112毫升蒸餾水稀釋入150毫升三角瓶中，用紙封口，高壓**2小時。
將快速砂芯漏斗，事先在80度烘箱烘干后馬上記錄重量，再烘干稱重一次，。將溶液在濾紙中過濾，并用熱水沖洗，濾后漏斗80度烘干稱重兩次。
光度法： 組織用甲醇：氯仿：水=10：5：4， 抽提2次移去色素，再擠壓后測定A325吸光度。
酚類物質用Folin-Ciocalteau 方法（BOX-1983 Water Research pp511）
抽提方法：葉子30-40度烘干2天，-15°C冷凍保存。測定前用瓷研缽研磨，過0.45毫米篩。稱取10毫克放于2毫升Eppendorf管中，加50%丙酮1毫升。將Eppendorf管中平放于紙盒內，在室溫搖床上黑暗提取2小時，然后4000g（小離心機11500轉）離心10分鐘（或用0.22微米WatermanGF/C濾紙過濾），上清液轉入一1.5毫升Eppendorf管中于冰箱中放置；再將殘余用50%丙酮0.5毫升提一次，合并上清，用蒸餾水定容至1.5毫升。取0.8毫升于事先加入PVPP24毫克的2毫升Eppendorf管中作PVPP空白（PVPP在酸性或中性條件下才可有效結合酚類為不溶）：震蕩2小時或者4度冰箱保存過夜，4000g離心。準備長試管，內用滴定管加10毫升蒸餾水，取2支各加入非PVPP提取液和PVPP空白0.1-0.2毫升（狐尾藻0.1毫升，其它草0.2毫升），立即加入碳酸鈉1.5毫升與Folin-Ciocalteau試劑0.5毫升，15-25oC顯色60分鐘。用蒸餾水為空白，以1厘米光程測定750納米吸光度值，并減去試劑空白值（即PVPP檢驗值）既可，用單寧酸或間苯三酚為基準做標準曲線。單寧酸標準為0、2、4、6、8、10毫克每升（顯色液體中濃度）。注意：混勻液體與統(tǒng)一比色杯很重要。注意比色杯在干和濕情況下吸收可能不同。為避免各次之間系統(tǒng)誤差，可用丹寧酸（30%丙酮，100mg/250ml）作為標準基準樣。光度計在調好零點后，在測定期間注意不要碰到旋鈕，可放置一小燒杯于旋鈕上。新鮮葉子在-15度下可長期保存。提取液要保存的話加為0.001M的抗壞血酸。
