周鵑　印培民

摘要：報(bào)道了用HP20大孔吸附樹脂從發(fā)酵液中提取Mevastatin的研究結(jié)果。HP20大孔吸附樹脂每mL濕樹脂對(duì)Mevastatin的吸附能力為83.8 mg 。用本方法制取的Mevastatin 純度達(dá)95%(HPLC)，完全符合用于Pravastatin的生產(chǎn)。
關(guān)鍵詞：HP20大孔吸附樹脂；Mevastatin；吸附
中圖分類號(hào)：TQ460.6⁺4；R972⁺.6；TQ424.3　　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A1　材料和方法

1.1　吸附樹脂

ZHOU Juan¹， YIN Pei-min²
(1.Jiangxi Institute for Drug Control， Nanchang 330046， PRC;
2.Institute of Microbiology,Jiangxi Academy of Sciences， Nanchang 330029,PRC)

　　Abstract：This paper described the method of recovery of Mevastatin from fermentation liquid by macroreticula adsorbent HP20.The adsorption ability of HP20 is 83.8 mg Mevastatin/ml resin.The purity of Mevastatin produced by this method is detected as 95% with HPLC.This technic is highly suitable for using as the raw material for Pravastatin production.
　　Key words：Macroreticula adsorbent HP20；Mevastatin；Adsorption

　　羥甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG-GoA)抑制劑Pravastatin Na是**由高血脂引起的心血管**的*新一代**藥。Pravastatin Na的生產(chǎn)方法為微生物二步發(fā)酵法。先由青霉(Penicillium citrinum)從糖發(fā)酵生產(chǎn)Mevastatin(又名Compactin,ML-236B)。經(jīng)提取精制得到的Mevastatin在NaOH作用下轉(zhuǎn)化為Mevastatin Na,再由Streptomyces carbophilus等具有羥基化酶活性的微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化為Pravastatin Na^{［1，2］}。
　　關(guān)于從發(fā)酵液中提取精制Mevastatin的方法，有報(bào)道：有機(jī)溶媒萃取結(jié)合各種層析技術(shù)^{［3，4］}，但未見其它論文公開報(bào)道。我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)選出了HP20大孔吸附樹脂，它具有非常優(yōu)良的對(duì)Mevastatin的吸附性能，所構(gòu)建的提取精制工藝簡(jiǎn)單、高效，**工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。


　　HP20(Diaion)，使用前按常規(guī)處理。
1.2　Mevastatin發(fā)酵液
　　由Penicillium citrinum thom 38065發(fā)酵而得，Mevastatin的質(zhì)量濃度在400 mg^．L^-1左右。
1.3　Mevastatin標(biāo)準(zhǔn)品
　　由日本靜岡大學(xué)生物工學(xué)研究室提供。純度為99%(HPLC)。
1.4　試劑
　　各種試劑均為化學(xué)純或HPLC級(jí)。
1.5　Mevastatin的分析方法
　　Mevastatin的濃度用高壓液相色譜法測(cè)定(島津LC-10AD型)。
　　流動(dòng)相：甲醇77%、水22.8%、醋酸0.1%、三乙胺0.1%。
　　流　速：1.0 mL^．min^-1。
　　分析柱：STR ODS-II，4.6 mm×150 mm(日本信和化工株式會(huì)社)。
　　測(cè)定波長(zhǎng)(λ)：237 nm。
　　測(cè)定溫度：25 ℃。
　　測(cè)定時(shí)間：10 min (Mevastatin的保留時(shí)間為(6.5±0.2) min)。
1.6　采用動(dòng)態(tài)吸附法^［5］
　　樣品被吸附后，樹脂用無(wú)鹽水洗滌，φ=0%～100%丙酮梯度解吸。


　　Mevastatin溶液在HP20樹脂上的吸附曲線如圖1 (Fig.1)所示。V_吸附(濾液量)∶V(HP20樹脂)在150∶1以內(nèi)時(shí)，吸附效果*好，無(wú)Mevastatin泄漏。當(dāng)該體積比大于150∶1時(shí)，Mevastatin的泄漏急劇上升。至170∶1時(shí)，樹脂吸附基本完成，此后吸附量緩慢上升，至220∶1時(shí)，達(dá)吸附平衡狀態(tài)。該吸附曲線表明，HP20樹脂對(duì)Mevastatin有很強(qiáng)的吸附力，每1 mL濕樹脂對(duì)Mevastatin的吸附量為83.8 mg。Mevastatin發(fā)酵液在HP20樹脂上的吸附行為亦如圖所示，但總吸附量由于發(fā)酵液中各種雜質(zhì)的影響而有所下降。此后用無(wú)鹽水洗滌吸附樹脂，以除去各種無(wú)機(jī)離子、部分色素等雜質(zhì)。2　結(jié)果和討論

2.1　Mevastatin在HP20脂樹上的吸附和解吸

　　Mevastatin在HP20樹脂上的解吸曲線如圖2(Fig.2)所示。采用φ=0%～100%丙酮梯度洗脫。當(dāng)丙酮在φ=0%～20%時(shí)，大量吸附在樹脂上的色素被洗脫而無(wú)Mevastatin被洗脫。進(jìn)一步將丙酮從φ=20%升至φ=100%時(shí)，被吸附在樹脂上的Mevastatin在φ=(30%～60%)的丙酮中被集中洗脫下來(lái)。所收集的含Mevastatin的洗脫液為淡黃色，濃縮比達(dá)15倍以上。充分體現(xiàn)了梯度洗脫液體積小，時(shí)間短的特點(diǎn)。之后樹脂在高體積分?jǐn)?shù)的丙酮下完成清洗，用水再生后即可重新使用。

2.2　實(shí)驗(yàn)室提取實(shí)驗(yàn)
　　用HP20樹脂從發(fā)酵液中提取精制Mevastatin的工藝如下：發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾得濾液，濾液用2 mol^．L^-1 HCl調(diào)pH至7.0，進(jìn)HP20樹脂柱吸附。當(dāng)進(jìn)樣量達(dá)到樹脂的工作吸附容量，即檢有Mevastatin漏出時(shí)，停止進(jìn)樣。繼而用無(wú)鹽水洗滌HP20樹脂后，用φ=(0%～100%)丙酮梯度洗脫，收集含Mevastatin的解析液。用w=0.05%活性炭脫色后，蒸去丙酮，濃縮凍干得Mevastatin粗品。粗品用少量φ=35%的丙酮復(fù)溶后，加入3～5倍pH 2.0的蒸鎦水結(jié)晶得Mevastatin。各步收率和純度見表1(Tablel)。