適合用于有機溶劑分離嗜脂性分子，天然產(chǎn)物在有機溶劑中的純化?？梢苑浅＝?jīng)濟的大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物，尤其在中藥有效成分提取中作為大孔吸附樹脂解析物的純化。 

結合凝膠過濾﹑分配色譜及吸附層析于一身，能分離結構相近的分子。因此使用中要考略幾種色譜的作用機制。 

*高載量可達250mg樣品/ml凝膠﹑極少需要再生﹑使用得當，分離效果可保持不變。 

上樣量視被分離物的結構性能的差異而定－差異大，則大；差異小，則小。 

凝膠過濾的上樣量一般為5－7％的床體積，我們建議初次上樣量控制在1－2％的床體積，視分離情況可以逐步增加；柱高的選擇也與分離要求相關――難分物質要有一定柱高和流速控制；流動相可參考TLC的條件，正確的流動相可以提高分離度并縮短分離時間。 

流動相的常用溶劑為：水 甲醇 丙酮 乙酸乙酯 二氯甲烷 

上述溶劑的極性依次降低，對帶有極性的被分離物而言，保留值和分離度依次遞增；同理選用的凝膠柱高可依次降低，流速可以增大(或上樣量可以增加，樹脂體積在低極性溶劑中明顯收縮)。 

溶劑的溶解性，極性，沸點，毒性都是要考慮到的，二氯甲烷通常對被分離物質間的極性和堿性差異比較小時采用。 

甲醇通常對帶環(huán)狀(包括苯環(huán))物質分離采用，葡聚糖凝膠對環(huán)狀物質有強烈吸附。LH-20同時具備親水和親脂雙重性質，且被分離物質的極性在分離過程中起著重要作用。 

使用方法：將干粉浸泡于60—70％乙醇中過夜(充分攪拌)，洗去可能存在的殘留物，抽干然后濕態(tài)不間隙裝柱，**不能出現(xiàn)凝膠斷層(否則要重新裝柱)，動態(tài)用一倍柱體積的60—70％乙醇淋洗，再用水洗凈乙醇即根據(jù)自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止，如改變溶劑應該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質，并根據(jù)性質確定柱高.如使用相同的溶劑，在以后的層析中柱平衡可以省略。 

1. 葡聚糖凝膠 LH-20 的原理。 

葡聚糖凝膠 LH-20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主，兼具反相分配的作用(在反相溶劑中)。因為凝膠過濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫下來，小分子的化合物保留強，*后出柱。如果使用反相溶劑洗脫， Sephadex LH-20對化合物還起反相分配的作用，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來，極性小的化合物保留強，后出柱。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過濾作用來分離。 

2. 葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑。

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類：反相和正相兩種。用得*多的是反相溶劑洗脫，以甲醇--水系統(tǒng)*為常見，先用水，逐漸增加甲醇比例，*后用100％甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯仿--甲醇*為常見，先用50％氯仿--甲醇，逐漸增加甲醇比例，*后用100％甲醇沖柱。 

3.樣品的處理和洗脫溶劑的選擇。

如果樣品極性大，選用反相溶劑洗脫(甲醇--水)，樣品用*少體積的甲醇--水(盡可能甲醇少一些)溶解，過濾后，濕法上樣(必須要進行過濾！否則把Sephadex LH-20 堵塞，就必須將Sephadex LH-20 的柱頭部分棄去，造成不必要的浪費)。如果樣品極性小，這選用正相溶劑洗脫(氯仿--甲醇)，樣品用*少體積的氯仿--甲醇溶解，過濾后，濕法上樣。

4. 葡聚糖凝膠 LH-20的步驟。
(1) 選擇條件：
梯度洗脫在葡聚糖凝膠 LH-20使用中并不象在正相柱層析中那么重要。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中。極性在的用甲醇水系統(tǒng);極性小者一般用不含水的系統(tǒng)。我們實驗室常用正己烷二氯甲烷甲醇系統(tǒng)，用了很多年，效果較好。
(2) 飽和層析柱：
用洗脫劑將凝膠搖勻，直立柱身，讓其自然沉降，此時要防止氣泡留在其中。至少半小時打開開關，流出幾個柱體種的洗脫劑，目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。
(3) 樣品處理：用盡量少的洗脫劑溶解樣品，常壓過濾。
(4) 濕法上柱。這也是要有技巧的步驟。
(5) 洗脫：控制流速，一般1drop/s以下，可參見廠家的一些參數(shù);必要時更改極性(很多時一個極性就可以將樣品洗脫完畢)。
再生以備下次使用。